Cell culture | 農藥百科
![Cell culture](https://i.imgur.com/WMTbIbA.jpg)
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Cell culture | 細胞凍存
細胞凍存最常用的技術是液態氮冷凍保存法,為了保存不易獲得的細胞株,因應不同的細胞貼覆及細胞生長狀態,採用不同的冷凍法凍存細胞,以下提出幾個細胞凍存需注意的面向。
細胞狀態
細胞應處於生長旺盛、最健康的時期(log phase),可使往後在解凍細胞時獲得健康且生長快速的細胞。 細胞應為乾淨無汙染狀態。可借由顯微鏡觀察是否有細菌或是真菌的污染,並搭配Mycoplasma Detector[1] 來偵測細胞是否遭受黴漿菌的污染。 細胞應保有其特有性質,例如hybridoma應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。 冷凍保存之同時,亦應作一個 backup culture,若冷凍失敗,仍有預留之細胞存在。 冷凍保存之細胞濃度:1~5 x 106 cells/ml
凍存劑的選擇
Dimethyl sulfoxide (DMSO), Cell Culture Grade[2],無色且無菌。凍存細胞前需先配製冷凍保存溶液:將DMSO加入新鮮培養基中,使其最終濃度為5~10%,混合均勻,置於室溫下待用。若是DMSO濃度過高,增加細胞毒性,可以降低濃度;使用血清比例增高凍存細胞,亦具有保護作用;易分化的細胞則需要降低DMSO濃度或是使用毒性較低的凍存液。 特殊的凍存保護劑,例如凍存幹細胞等細胞株,需使用無血清來源搭配特殊配方,保護細胞在凍存過程中不受傷害,並降低其細胞自體分化現象。 凍存液應用於細胞治療: 細胞治療產品開發,注重凍存液的效能,及凍存液成分是否可能對人體產生安全性的疑慮,DMSO於部分的動物實驗及臨床實驗中證實可能會造成導致副作用的發生,包含頭痛、噁心或腹瀉等症狀,另一個案例為間質幹細胞(...
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